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葡萄糖(GO)检测试剂盒产品中文说明书
2020.03.02   点击65次

(本中文说明书为翻译稿,仅供参考,应以英文版为准)

货号:3091314 (Sigma-Aldrich : GAGO20)

储存温度:2-8℃

产品描述:

酶作为一种分析工具,在食品、生化和制药工业中得到了广泛的应用。酶的方法是特异性的,可重复的,灵敏的,快速的,因此,是分析目的的理想方法。由于酶的高特异性和敏感性,定量分析可以在很少或没有样品准备的情况下进行1-5

本试剂盒用于食品和其它材料中葡萄糖的定量、酶法测定。各种出版物已经报道了在不同的系统和样本上使用该试剂盒,包括果蝇6-8、牛粪9、培养的小鼠肌肉细胞10、HEPG2细胞11和水生生物12

原理:

葡萄糖(GO)检测试剂盒原理图

• 葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢。

• 过氧化氢在过氧化物酶的存在下与邻二苯胺反应生成有色产物。

• 氧化的邻二苯胺与硫酸反应生成更稳定的有色产品。

• 在540 nm处测得的粉红色的强度与原始葡萄糖浓度成正比。

试剂盒组成:

1、葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂

• 将未打开的试剂盒试剂保存在2-8℃。每个胶囊包含500单位的葡萄糖氧化酶(黑曲霉),100单位(purpurogallin units)的过氧化物酶(辣根)和缓冲盐。

• 将胶囊内容物倒入琥珀色的瓶子中。

• 将这些物质溶解在39.2 mL去离子水中。

• 该溶液在2-8℃最多稳定一个月,在-20℃冷冻至少六个月。

• 如果出现浑浊,请丢弃。

2、邻二苯胺试剂

• 将未打开的试剂盒试剂保存在2-8℃。尽量减少曝光。预先称量的小瓶中含有5毫克的邻二苯胺盐酸盐。

• 用1.0 mL的去离子水重新配制邻二苯胺小瓶的内容物。

• 翻转样品瓶几次以溶解。

• 避免将试剂暴露在光线下。

• 溶液在2-8℃下稳定3个月。

3、分析试剂

• 向装有39.2 mL葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂的琥珀瓶中加入0.8 mL邻二苯胺试剂。

• 将瓶子倒过来几次混合。

• 尽量减少暴露在光线下。

• 溶液在2-8℃下稳定1个月。

• 如果出现浑浊或其他颜色,请丢弃。

4、葡萄糖标准溶液

• D-葡萄糖,在0.1%的苯甲酸中为1.0 mg/mL。

• 该标准可追溯到NIST标准,并提供即用型。

• 在2-8℃稳定至少六个月。

• 如果出现混浊,请丢弃。

必需但未提供试剂:

硫酸,ACS试剂,为18M硫酸试剂。在去离子水中准备6M溶液。

仪器:

1、分光光度计或比色计:可在540nm下测定吸光度。

2、比色皿。

3、试管,18 mm×150 mm

4、移液器:能够准确分配20 μL至2.0 mL的体积。

5、能保持温度在37℃的水浴锅

注意事项和免责声明:

本试剂仅供科研使用,不能用于药品、家庭以及其他用途。有关危险和安全操作规程的信息,请参阅安全数据表。

操作步骤:

样品制备:

液体:

• 用去离子水将样品稀释至葡萄糖浓度为20-80μg/mL。

• 如有必要,对溶液进行过滤或去蛋白处理以使其澄清。

• 样品葡萄糖含量较低且颜色较深时,应予以脱色处理。

• 含碳酸或发酵样品,须脱气处理。

固体:

• 称量0.1mg样品。

• 用去离子水提取样品。可以将溶液加热(<75℃)以帮助萃取。

• 用去离子水稀释提取液品至葡萄糖浓度为20-80μg/mL。

• 如有必要,对溶液进行过滤或去蛋白处理以使其澄清。

测定:

方法1:标准曲线中的葡萄糖浓度

1、吸取以下溶液到相应的试管中:

试管水(ml)样品(ml)葡萄糖标准溶液(ml)
空白试剂1.00--
1#   试管0.98-0.02
2#   试管0.96-0.04
3#   试管0.94-0.06
4#   试管0.92-0.08
测试-1.00-

2、计时起点,通过向第一个试管中加入2.0 mL的测定试剂开始反应并混合。在向每个后续试管中添加测定试剂之间,要间隔30至60秒。

3、让每个试管在37℃下反应30分钟。通过在每个试管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液,以30-60秒的间隔停止反应。小心地将各管彻底混合。

4、在540 nm处测量每个试管对空白试剂的吸光度。

方法2:单一标准品中的葡萄糖浓度

1、吸取以下溶液到相应的试管中:

试管水(ml)样品(ml)葡萄糖标准溶液(ml)
空白试剂1.00--
1#   试管0.95-0.05
测试-1.00-

2、计时起点,通过向第一个试管中加入2.0 mL的测定试剂开始反应并混合。在向每个后续试管中添加测定试剂之间,要间隔30至60秒。

3、让每个试管在37℃下反应30分钟。通过在每个试管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液,以30-60秒的间隔停止反应。小心地将各管彻底混合。

4、在540 nm处测量每个试管对空白试剂的吸光度。

结果:

计算方法1:

对于标准品,绘制540 nm处的吸光度(y轴)与葡萄糖的毫克含量(x轴)标准曲线。如果标准曲线不是线性的,则结果将不准确。重复测定。

对于测试,从标准曲线确定葡萄糖毫克数。

将上面确定的毫克葡萄糖乘以样品制备中的稀释倍数。

计算方法2:

葡萄糖(GO)检测试剂盒测定结果计算公式

将上面确定的毫克葡萄糖乘以样品制备中制备的稀释倍数。

参考文献:

1、Bergmeyer, H.U. and Bernt , E., Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, ed.). Academic Press (New York, NY), 2nd ed., pp. 1205-1212 (1974).

2、Official Methods of Analysis, 16th Edition. AOAC International, Sections 32.2.05 and 44.7.12 (1995).

3、Raabo, E. and Terkildsen, T.C., Scand. J. Clin. and Lab. Invest., 12(4), 402-407 (1960).

4、Southgate, D.A.T., Determination of Food Carbohydrates. Applied Science Publishers, Ltd. (London, 1976).

5、Washko, M.E. and Rice, E.W., Clin. Chem., 7(5), 542-545 (1961).

6、Wen, Z. et al., Appl. Biochem., Biotechnol., Spring; 121-124, 93-104 (2005).

7、Huang, J.-H. and Douglas, A.E., Biol. Lett., 11(9), 20150469 (2015).

8、Unckless, R.L. et al., G3 (Bethesda), 5(3), 417-425 (2015).

9、Tennessen, J.M. et al., Methods, 68(1), 105-115 (2014).

10、Hien, T.T. et al., J. Biol. Chem., 291(7), 3552-3568 (2016).

11、Whitehead, T.D. et al., J. Nucl. Med., 54(10), 1812-1819 (2013).

12、Hsiao, C.J. et al., Dis. Aquat. Organ., 119(3), 199-206 (2016).

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